细胞转染是将外源性遗传物质引入目标细胞内的关键技术，广泛应用于生命科学研究、药物开发及新药研发等领域。在众多转染方法中，化学转染法因其易于调控化学物质的浓度与作用时间，成为生物技术领域的常用选择。

转染试剂的选用策略

选择合适的转染试剂是保证细胞转染实验成功与高效的基础。市场上存在众多转染试剂，通常质量参差不齐，如何选取出最适合的产品呢？

1. 根据实验目的选择

依据实验需求选择稳定转染或瞬时转染。稳定转染通常需要具有复制能力的质粒或病毒载体，而瞬时转染则不要求。稳定转染多使用脂质体类试剂，通过内吞作用实现；而瞬时转染则多采用纳米聚合物类试剂。

2. 根据细胞类型选择

不同细胞类型对转染效率的影响显著。例如，HEK293T细胞的转染效率较高，而某些癌细胞（如HepG2、A549等）的转染效率较低，给实验带来挑战。贴壁细胞和悬浮细胞对转染试剂的需求也有所不同，前者通常选用脂质体，而后者则偏好聚合物。选择具体的转染方式应基于细胞类型的特性进行调整。

3. 根据基因类型选择

转染涉及DNA和RNA两种形式。DNA转染主要用于外源DNA片段的导入，而RNA转染则关注干扰RNA的引入。不同的转染试剂在DNA和RNA转染中的表现可能不同，且大于10,000 bp的DNA载体转染难度增大，许多产品难以实现有效转染。

4. 根据转染效果评估

理想的转染试剂应具备高转染效率和低细胞毒性。高效转染能确保外源基因有效导入，而低细胞毒性则有助于提高细胞存活率，确保实验数据的可靠性。市场上许多常见转染试剂的细胞死亡率一般在15%至30%之间，建议选择细胞死亡率低于15%的产品以提升实验竞争力。

5. 根据操作简便性选择

选择操作方便、节省时间的转染试剂对实验效率有显著提高。操作简便性的考量包括转染过程中是否需要更换培养基、试剂成分数量、孵育方式和时间，以及核酸溶液是否需要稀释等。这样可以简化实验操作，降低实验材料和时间成本。

南宫28的转染试剂1BGPNAM11/BGPNAM11Plus以纳米阳离子聚合物为主要成分，能够有效与带负电荷的核酸分子结合并导入细胞，表现出优异的siRNA和质粒DNA转染效率。对于HEK293/293T等工程细胞，转染效率可达95%以上，且其细胞毒性较低，转染48小时后细胞活率保持在85%。此外，该试剂不需要在转染前后更换培养基，操作简便，节省了时间成本。

客户反馈显示，转染试剂LNP30iMate是一款由脂质体介导的试剂，适用于siRNA、mRNA和其他小RNA的转染，HEK293T等细胞的转染效率达90%以上，24小时后细胞存活率达到90%。同样，LNP60iMate在多种工程细胞及癌细胞上也表现出良好效果，细胞活率在转染24小时后维持在90%以上。

实验要点

影响转染效果的因素

• 抗生素: 抗生素在细胞培养基中可能影响转染效率，虽然对真核细胞无毒，但会增加脂质体的细胞通透性，降低细胞活性。
• 血清: 血清的存在会降低转染效率，需优化转染条件。
• 细胞状态: 使用1-2次传代的细胞状态最佳。
• 细胞密度: 贴壁细胞通常在60%-90%的汇合度，悬浮细胞密度保持在1x10^6 ~5x10^6细胞/mL。
• 核酸质量: 高纯度、无内毒素的核酸会提高转染效率。

转染后为什么需要更换培养液

很多转染试剂在转染前需要用无血清培养基，以避免血清影响转染效果。转染后，为了保证细胞正常生长，需在几个小时后更换成完全培养基。此外，转染试剂本身较强的细胞毒性，也要求在一定时间后更换培养液，以保护细胞不受损伤。

判断细胞汇合度的方法

细胞汇合度可以通过光学显微镜观察细胞的铺展情况和重叠程度进行判断，以确保最佳转染效果。