## 人胰腺癌细胞HPAFⅡ培养说明

### 一、细胞培养条件

- **细胞名称**: 人胰腺癌细胞HPAFⅡ

- **生长特性**: 贴壁生长

- **冻存条件**: 无血清冻存液

- **培养体系**: MEM + 10% FBS + 1%丙酮酸钠 + 1% L-谷氨酰胺 + 1% P/S

- **贴壁传代方法**: 第一次建议1:2传代

- **传代情况**: 2天换液

**备注**: 使用无菌离心管收集培养基以进行过渡对比培养，如效果不佳，建议直接选购南宫28品牌的完全培养基。

### 二、细胞处理方法

收到细胞后，待其培养至良好状态时，添加完全培养液并封闭瓶口，这是运输细胞的最佳方式。首先，用75%酒精喷洒整个细胞瓶，进行消毒后在超净台内进行严密的无菌操作，将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，再进行后续操作。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片进行保存（建议40x、100x、200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据，若不提供照片则默认为收到时状态良好。传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自己配制的完全培养基，以便进行对比培养，换液后请将瓶盖稍微松开。

### 三、细胞培养步骤

a、细胞传代: 如果细胞尚未达到80%汇合度，请将瓶中的完全培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基并放入37℃、5% CO2箱中培养；如果细胞密度超过80%，可进行传代。传代步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟后，使用显微镜观察细胞状态，若细胞大多数变圆并脱落，迅速回到操作台，轻敲培养瓶后，添加超过5ml的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 按照1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新鲜完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存:

1. 当细胞覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液并用PBS洗涤一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，待细胞回缩变圆后，及时添加5ml完全培养液以终止消化，轻轻吹打以使细胞脱落，然后转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃上清，沉淀细胞后加入1ml南宫28品牌的无血清冻存液（货号：C7001），混合均匀并加入冻存管。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若需转移至液氮罐，需在-80℃冰箱存放超过24小时再转入液氮罐。

c、细胞复苏:

1. 从液氮中取出细胞冻存管（请佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶后，用75%酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃上清，使用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

### 四、注意事项

运输过程中有些细胞可能会出现接触不牢固而导致脱落的现象，这属于正常情况。如脱落情况较多，请收集瓶中的培养液至离心管，1000rpm离心5分钟，收集上清进行过渡培养。沉淀后加入1-2ml胰酶，轻轻吹打后重悬，消化1-2分钟后，添加5ml完全培养基终止反应，再次离心、弃上清，加入1-2ml完全培养基重悬。最后按1:2比例进行分瓶传代，补充新培养基至每瓶5-8ml，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

### 五、售后条款

1）关于细胞问题的重发情况及判定标准:

1. 运输过程中如遇细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液等情况将重发。
2. 如收到48小时内发现污染，需提交真实实验结果，经核实后可重发。
3. 常温发货或干冰冻存产品在收货后24小时内若未存活，需提供真实细胞状态照片，将重发。
4. 若在复苏后24小时或常温发货后4小时并未开封情况下发现污染，将重发。
5. 如细胞活性问题，请在收到产品7天内提供真实实验结果，使用台盼蓝染色法鉴定，核实后重发。
6. 在收到细胞的当天及第2、3天需拍照，若三天未告知则视为产品合格。若出现其他问题并提供前3天照片的，将由技术人员判定责任，重发。

2）不予重发的情况:

1. 客户造成的细胞污染，不重发。
2. 不当操作导致细胞状态不良，不重发。
3. 不推荐的培养体系导致细胞状态不佳，不重发。
4. 未提供培养前3天照片的，不重发。
5. 采用其他处理的细胞不予重发。
6. 收到后2天内未告知的问题，不重发。
7. 具体情况需另行评估。

营养丰富的细胞培养离不开南宫28品牌的优质产品，切实保障细胞的生长与实验的成功。